Типирование генов системы HLA II класса - локус DRB1 (код 7831HL)

Описание услуги
Типирование аллелей локуса DRB1 генов главного комплекса гистосовместимости (HLA, Human Leukocyte Antigens) II класса – это высокоточный молекулярно-генетический анализ, направленный на определение конкретных вариантов (аллелей) одного из ключевых генов, кодирующих молекулы HLA-DR. Эти молекулы, экспрессируемые на поверхности антиген-презентирующих клеток (макрофагов, дендритных клеток, B-лимфоцитов), играют фундаментальную роль в адаптивном иммунном ответе, представляя пептидные фрагменты чужеродных или собственных антигенов T-хелперам (CD4+ лимфоцитам). Локус DRB1 является чрезвычайно полиморфным – описаны сотни его аллельных вариантов. Конкретные аллели ассоциированы с предрасположенностью или устойчивостью к широкому спектру аутоиммунных и иммуноопосредованных заболеваний (например, носительство DRB1*04:01, *04:04, *04:05, *04:08 – с ревматоидным артритом; DRB1*03:01 и *04:01 – с сахарным диабетом 1 типа; DRB1*15:01 – с рассеянным склерозом). Кроме того, аллели DRB1 являются критическими маркерами при подборе гистосовместимого донора для аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток и органов, где несовпадение по этим локусам значительно повышает риск реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) и отторжения. Анализ также находит применение в фармакогенетике, например, для оценки риска развития тяжелых побочных реакций на некоторые препараты (карбамазепин, аллопуринол), ассоциированные с определенными аллелями HLA. Методология исследования обычно основана на полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей гибридизацией с последовательно-специфичными олигонуклеотидными зондами (ПЦР-SSO) или использованием специфичных праймеров (ПЦР-SSP), что позволяет достичь высокого разрешения (часто на уровне 4 цифр, напр., DRB1*04:01).
 

Показания к назначению
Диагностика и дифференциальная диагностика аутоиммунных заболеваний, оценка генетической предрасположенности, планирование трансплантации и индивидуальный подход в фармакотерапии.

• Дифференциальная диагностика и оценка риска развития аутоиммунных заболеваний: при подозрении на ревматоидный артрит (особенно серонегативные формы), анкилозирующий спондилит (в комплексе с HLA-B27), системную красную волчанку, синдром Шегрена, аутоиммунные заболевания щитовидной железы, сахарный диабет 1 типа, рассеянный склероз, целиакию, миастению гравис.
• Планирование аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток или солидных органов: для подбора оптимально гистосовместимого донора (родственного или неродственного) и оценки степени совпадения по локусам HLA II класса, что критически важно для снижения частоты и тяжести РТПХ и отторжения трансплантата.
• Обследование потенциальных доноров костного мозга и стволовых клеток для регистрации в национальных и международных регистрах доноров (например, в Русском регистре доноров костного мозга).
• Фармакогенетическое тестирование: перед назначением препаратов, ассоциированных с развитием тяжелых гиперчувствительных реакций, опосредованных HLA. Ключевые примеры: оценка аллелей DRB1*07:01 перед терапией клазапином для прогнозирования риска лекарственной лихорадки; связь DRB1*01:01 с гепатотоксичностью флуклоксациллина; роль определенных аллелей в патогенезе многоформной эритемы, индуцированной препаратами.
• Уточнение диагноза при неясной клинической картине, сочетании симптомов, характерных для различных иммунопатологических процессов, а также при отягощенном семейном анамнезе по аутоиммунной патологии.
• Научные и эпидемиологические исследования, направленные на изучение генетической предрасположенности популяций к определенным заболеваниям.

Подготовка к анализу
Специальной сложной подготовки не требуется, что делает анализ доступным. Однако для обеспечения качества биоматериала и достоверности результата важно соблюсти ряд стандартных условий.

• Строгих требований к голоданию нет. Кровь можно сдавать через 3-4 часа после легкого приема пищи, исключив жирную пищу. Предпочтительно сдавать кровь утром натощак для стандартизации условий.
• Рекомендуется ограничить физические и эмоциональные нагрузки за 30 минут до взятия крови.
• Не курить в течение 30 минут до сдачи анализа.
• На результат генетического исследования не влияют текущие воспалительные процессы, прием большинства лекарственных препаратов (антибиотиков, противовирусных, НПВС), гормональный статус или фаза менструального цикла. Однако, для исключения потенциального влияния на общее состояние, рекомендуется сообщить врачу о всех принимаемых препаратах.
• Если исследование проводится в рамках подготовки к трансплантации, крайне важно точно идентифицировать пациента и донора во избежание фатальных ошибок несовместимости.

Биоматериал
Для анализа используется венозная кровь, стабилизированная ЭДТА (K2EDTA или K3EDTA), поскольку это обеспечивает сохранность геномной ДНК лейкоцитов. Качество биоматериала напрямую влияет на успешность выделения ДНК и дальнейшей ПЦР.

• Тип биоматериала: Цельная венозная кровь (2-5 мл в зависимости от пробирки).
• Консервант: Пробирка с лиловой крышкой (K2/K3 ЭДТА). Важно полностью заполнить пробирку для правильного соотношения кровь/антикоагулянт.
• Взятие и хранение: После взятия пробирку необходимо плавно перевернуть 8-10 раз для перемешивания с антикоагулянтом. Не встряхивать. Хранить и транспортировать строго при температуре +2…+8 °C. Замораживание цельной крови недопустимо, так как приводит к гемолизу и деградации ДНК.
• Критерии непригодности образца: Сильный гемолиз, сгустки в пробе, недостаточный объем крови, нарушение температурного режима хранения/транспортировки, неправильная маркировка пробирки.
• В особых случаях (например, для посмертного типирования) может использоваться другой биоматериал – буккальный эпителий, ткани, но это требует согласования с лабораторией.

Срок выполнения 10-14 рабочих дней.
 

Референсные значения
Результат представляет собой аллельный вариант (генотип) локуса DRB1. Референсных (нормальных) значений как таковых не существует, поскольку речь идет о генетическом полиморфизме, а не о количественном показателе. Каждый человек является носителем двух аллелей локуса DRB1 (по одному от каждого родителя), которые могут быть одинаковыми (гомозигота) или разными (гетерозигота). Отчет лаборатории содержит конкретное обозначение обнаруженных аллелей в соответствии с международной номенклатурой WHO Nomenclature Committee for Factors of the HLA System (например, DRB1*01:01, DRB1*15:01). Интерпретация заключается не в сравнении с нормой, а в установлении факта наличия или отсутствия конкретных аллелей, ассоциированных с клинически значимыми состояниями или необходимых для оценки совместимости. Чувствительность и специфичность современных методов ПЦР-SSO/SSP для типирования DRB1 превышают 99%. В редких случаях может быть выявлен новый, ранее не описанный аллельный вариант, требующий секвенирования для точной идентификации.
 

Интерпретация результатов
Интерпретацию проводит врач-генетик, иммунолог, ревматолог, трансплантолог или другой профильный специалист с обязательным учетом клинической картины, данных анамнеза и результатов других исследований. Наличие определенного аллеля не равноценно диагнозу, а указывает на повышенную генетическую предрасположенность.

• Выявление аллелей, ассоциированных с аутоиммунными заболеваниями: Например, обнаружение DRB1*04:01 у пациента с полиартритом и утренней скованностью усиливает подозрение на ревматоидный артрит, особенно в сочетании с антителами к цитруллинированным пептидам (АЦЦП). Однако данный аллель присутствует и у части здоровых лиц (популяционная частота около 5-15% в Европе), поэтому его выявление в отсутствие клиники не является основанием для диагноза. Это инструмент для оценки риска и углубленной диагностики. Комбинация нескольких ассоциированных аллелей (гаплотип) может существенно повышать риск.
• Оценка совместимости для трансплантации: Результаты типирования реципиента и потенциальных доноров сравниваются по принципу «степени совпадения». Идеальным является 10/10 совпадение по основным локусам (HLA-A, -B, -C, -DRB1, -DQB1). Несовпадение по одному или двум аллелям DRB1 (особенно в высокоиммуногенных эпитопах) значительно увеличивает риск острой и хронической РТПХ, иммунологического отторжения и может потребовать более интенсивной иммуносупрессивной терапии. Решение о допустимости несовпадения принимает консилиум трансплантологов.
• Фармакогенетические рекомендации: Выявление аллеля, ассоциированного с тяжелой побочной реакцией на конкретный препарат (например, DRB1*07:01 для клазапина), является абсолютным или относительным противопоказанием к его назначению. Врач должен рассмотреть альтернативные терапевтические опции. В случае если препарат жизненно необходим, его применение возможно под пристальным медицинским наблюдением с информированного согласия пациента.
• Отрицательный результат (отсутствие исследуемых ассоциированных аллелей): Снижает вероятность определенной генетически опосредованной формы заболевания, но не исключает диагноз полностью, так как патогенез многих болезней мультифакториален. Диагноз по-прежнему основывается на клинических критериях.
• Ложные результаты: Крайне редки при использовании современных методов. Возможные причины: контаминация образца, перепутанные пробы, технические ошибки на этапе ПЦР, наличие редкого или нового аллеля, который система не смогла корректно определить. При несоответствии результата клинической картине рекомендуется повторное исследование или использование альтернативной методики (секвенирование следующего поколения, NGS).