Генетические причины нарушений сперматогенеза (6 микроделеций AZF) (код 7252AZFI)

Описание услуги
Молекулярно-генетический анализ микроделеций в локусе AZF (фактор азооспермии) на Y-хромосоме - это высокоточный метод диагностики, направленный на выявление наиболее частых генетических причин нарушенного сперматогенеза у мужчин. Локус AZF расположен на длинном плече Y-хромосомы (Yq11) и содержит множество генов, критически важных для нормального процесса образования и созревания сперматозоидов. В результате гомологичной рекомбинации между повторами в этой области могут возникать делеции (потери участков ДНК), которые классифицируются на три основные подрегиона: AZFa, AZFb и AZFc. Каждая из этих делеций имеет характерные фенотипические проявления: от полного отсутствия сперматогенных клеток (синдром Сертоли) при AZFa-делециях до тяжелой олигозооспермии или азооспермии с возможным сохранением единичных сперматозоидов при AZFc-делециях. Анализ, включающий определение 6 маркерных сайтов (sY84, sY86 для AZFa; sY127, sY134 для AZFb; sY254, sY255 для AZFc), позволяет с высокой чувствительностью (близкой к 100%) и специфичностью идентифицировать наличие и тип микроделеции. Данное исследование имеет ключевое значение для определения прогноза фертильности, выбора тактики лечения (включая решение о целесообразности хирургического получения сперматозоидов - TESA/mTESE) и для медико-генетического консультирования пары, особенно при планировании методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), таких как ИКСИ, поскольку делеции могут передаваться сыновьям.
 

Показания к назначению
Анализ рекомендован мужчинам в рамках комплексного обследования по поводу бесплодия в парах. Ключевыми клиническими показаниями являются:

• Подтвержденная азооспермия (полное отсутствие сперматозоидов в эякуляте) или тяжелая олигозооспермия (концентрация сперматозоидов менее 5 млн/мл), особенно идиопатического характера, когда стандартные причины (варикоцеле, инфекции, гормональные нарушения) исключены.
• Планирование процедур ВРТ, в частности ИКСИ, для оценки генетического риска передачи Y-хромосомных делеций потомству мужского пола и определения вероятности успешного получения сперматозоидов при хирургических методах забора.
• Дифференциальная диагностика между обструктивной и необструктивной (секреторной) формами азооспермии. Выявление AZF-делеции указывает на секреторную форму.
• Наличие в семье случаев мужского бесплодия у родственников по мужской линии, что может свидетельствовать о наследственном характере нарушения.
• Крипторхизм в анамнезе в сочетании с нарушениями показателей спермограммы.
• Перед выполнением биопсии яичка (TESA, mTESE) для прогнозирования ее результативности: при полных делециях AZFa или AZFb вероятность найти сперматозоиды близка к нулю, в то время как при делециях AZFc она составляет около 50-70%.

Подготовка к анализу
Специфическая подготовка для сдачи генетического анализа не требуется, так как исследование проводится на ДНК, которая является стабильным биополимером. Однако для стандартизации процедуры и исключения потенциальных внешних факторов рекомендуется придерживаться общих правил:

• Не требуется соблюдения строгой диеты или голодания. Сдавать кровь можно в любое время суток.
• За 24 часа до исследования следует исключить прием алкогольных напитков и, по возможности, избегать значительных физических и эмоциональных нагрузок.
• Прием большинства лекарственных препаратов (антибиотики, витамины, гипотензивные средства) не влияет на результат анализа ДНК. Однако о постоянном приеме любых медикаментов следует проинформировать лечащего врача, направляющего на исследование.
• Курение не искажает результат, но рекомендуется воздержаться от курения за 1-2 часа до забора крови.

Биоматериал
Для проведения анализа используется периферическая венозная кровь. Стандартным образцом является цельная кровь, стабилизированная ЭДТА (K2EDTA или K3EDTA) для предотвращения коагуляции и сохранения целостности лейкоцитов - основного источника геномной ДНК. Минимальный необходимый объем обычно составляет 2-3 мл. Кровь забирается в вакутейнер с лиловой крышкой. После забора пробирку необходимо осторожно перевернуть 8-10 раз для равномерного смешивания крови с антикоагулянтом. Образец стабилен при комнатной температуре в течение 24 часов, при транспортировке рекомендуется использовать термоконтейнеры без хладагентов. Длительное хранение до выделения ДНК осуществляется при температуре +2...+8 °C. Непригодными для анализа считаются образцы с выраженным гемолизом, свернувшейся кровью или собранные в неправильные пробирки (например, с цитратом или гепарином, которые могут ингибировать последующие молекулярные реакции).
 

Срок выполнения
10-14 рабочих дней.
 

Референсные значения
Интерпретация анализа качественная, основана на детекции специфичных STS-маркеров (Sequence-Tagged Sites). Референсным (нормальным) результатом является наличие амплификации (определения) всех шести исследуемых маркеров (sY84, sY86, sY127, sY134, sY254, sY255), что свидетельствует об отсутствии микроделеций в локусах AZFa, AZFb и AZFc Y-хромосомы. В качестве внутреннего контроля используется амплификация гена SRY (определяющего мужской пол) или других конститутивных генов (например, ZFX/ZFY), подтверждающая адекватное количество и качество выделенной мужской ДНК и успешность постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР). Отсутствие амплификации одного или нескольких маркеров указывает на наличие делеции в соответствующем регионе. Важно отметить, что существуют различные варианты делеций: полные (отсутствие всех маркеров региона), частичные (отсутствие части маркеров) и комбинированные (например, AZFb+c). Единых количественных референсных значений, как в биохимических анализах, для данного теста не предусмотрено.
 

Интерпретация результатов
Результат анализа требует обязательной интерпретации врачом-генетиком или андрологом в контексте клинической картины и данных спермограммы.

• Отсутствие микроделеций (норма): Все исследуемые маркеры определяются. Это исключает наиболее частые генетические причины, связанные с AZF-локусом, как основу нарушения сперматогенеза. Дальнейший диагностический поиск должен быть направлен на другие возможные причины: гормональные нарушения (ФСГ, ЛГ, тестостерон, ингибин В), обструктивные факторы, варикоцеле, хромосомные аномалии (кариотип), мутации в других генах (например, CFTR).
• Выявлена делеция региона AZFa: Полная делеция AZFa ассоциирована с наиболее тяжелой патологией - синдромом «только клеток Сертоли» (SCOS), при котором в канальцах яичка полностью отсутствуют сперматогенные клетки. При гистологическом исследовании обнаруживаются только клетки Сертоли. Прогноз на получение собственных сперматозоидов даже с помощью микрохирургической экстракции (mTESE) крайне неблагоприятный (близок к 0%). Рекомендуется рассмотреть использование донорской спермы или усыновление.
• Выявлена делеция региона AZFb: Полная делеция AZFb также приводит к тяжелой форме нарушения сперматогенеза, часто - к остановке на стадии сперматоцитов. Вероятность обнаружения зрелых сперматозоидов при биопсии яичка также минимальна. Прогноз для естественного зачатия или успеха TESE/mTESE очень низкий.
• Выявлена делеция региона AZFc: Наиболее частый тип делеций. Фенотип может варьировать от азооспермии до тяжелой олигозооспермии. Важной особенностью является возможная мозаичность гонад: даже при азооспермии в эякуляте, в отдельных канальцах яичка могут сохраняться очаги активного сперматогенеза. Поэтому вероятность успешного получения сперматозоидов при mTESE составляет в среднем 50-70%. Если сперматозоиды будут найдены и использованы для ИКСИ, делеция Y-хромосомы унаследуется всеми сыновьяями, что предопределит у них аналогичные проблемы с фертильностью в будущем.
• Комбинированные делеции (например, AZFb+c): Имеют более тяжелый прогноз, чем изолированная AZFc-делеция. Вероятность обнаружения сперматозоидов снижается.
• Ложноположительные результаты маловероятны при использовании качественных реагентов и соблюдении методики. Ложноотрицательные результаты возможны в редких случаях при наличии делеций в участках, не охваченных стандартными STS-маркерами, или при мозаицизме, когда делеция присутствует не во всех клетках. При клинически явных признаках, но отрицательном результате, может быть рассмотрено расширенное исследование (например, MLPA или NGS) для анализа всего AZF-локуса.