Генетические причины нарушений сперматогенеза (6 микроделеций AZF), без описания врачом-генетиком (код 7252БЗ)

Описание услуги
Молекулярно-генетическое исследование, направленное на выявление микроделеций (потерь небольших участков) в специфической области Y-хромосомы, известной как AZF-локус (фактор азооспермии). Данный локус содержит гены, критически важные для нормального процесса образования и созревания сперматозоидов (сперматогенеза). Анализ фокусируется на шести ключевых маркерных последовательностях (STSY14, SY81, SY86, SY127, SY134, SY152), расположенных в трех основных субрегионах: AZFa, AZFb и AZFc. Метод исследования - полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени, обладающая высокой специфичностью и чувствительностью для обнаружения отсутствующих фрагментов ДНК. Выявление делеции в любом из этих субрегионов является доказанной генетической причиной тяжелых нарушений сперматогенеза - от выраженной олигозооспермии (крайне низкое количество сперматозоидов) до азооспермии (полное отсутствие сперматозоидов в эякуляте). Этот анализ имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение, а также прямое влияние на выбор методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Показания к назначению
Основным показанием является мужское бесплодие, подтвержденное результатами спермограммы. Анализ рекомендован в следующих клинических сценариях:

• Секреторная (необструктивная) азооспермия: Отсутствие сперматозоидов в эякуляте при нормальном объеме эякулята и проходимости семявыносящих путей. Частота обнаружения AZF-делеций при этом состоянии достигает 10-15%.
• Тяжелая олигозооспермия: Концентрация сперматозоидов менее 5 млн/мл. Риск наличия микроделеции также существенно повышен.
• Криптозооспермия: Единичные сперматозоиды, обнаруживаемые только после центрифугирования эякулята.
• Планирование процедур ВРТ: Перед проведением экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) с интрацитоплазматической инъекцией сперматозоида (ИКСИ), особенно при использовании сперматозоидов, полученных хирургическим путем (TESA, microTESE). Выявление делеции важно для генетического консультирования пары, так как дефектная Y-хромосома будет передана всем рожденным сыновьям.
• Дифференциальная диагностика причин гипогонадизма в сочетании с исследованием уровня гормонов (ФСГ, ЛГ, тестостерон, ингибин В).
• Наличие в семейном анамнезе случаев мужского бесплодия у кровных родственников по мужской линии.

Подготовка к анализу
Специфической подготовки не требуется. Анализ выполняется на геномной ДНК, выделенной из лейкоцитов периферической крови, поэтому стандартные рекомендации аналогичны таковым для забора крови на биохимические исследования:

• Сдача крови предпочтительна утром, натощак (после 8-12 часов ночного голодания). Допускается сдача в течение дня не ранее, чем через 4 часа после легкого приема пищи.
• Накануне следует избегать пищевых перегрузок, употребления алкоголя.
• Рекомендуется исключить интенсивные физические и эмоциональные нагрузки непосредственно перед процедурой взятия крови.
• Прием большинства лекарственных препаратов (антибиотики, витамины, гипотензивные средства) не влияет на результат генетического теста. Однако о постоянном приеме любых лекарств следует информировать лечащего врача.
• Не рекомендуется сдавать кровь сразу после физиотерапевтических процедур, рентгенологического или ультразвукового исследования, ректального обследования.

Биоматериал
Для проведения анализа используется цельная периферическая венозная кровь, стабилизированная ЭДТА (K2- или K3-ЭДТА). Стандартный объем пробирки - 2-4 мл. Это оптимальный материал для выделения высококачественной геномной ДНК.

• Условия взятия: Забор производится стандартным вакуумным способом из локтевой вены в одноразовые пробирки с сиреневой (лавандовой) крышкой, содержащие антикоагулянт.
• Хранение и транспортировка: Пробирку с кровью необходимо осторожно перевернуть 8-10 раз для смешивания с антикоагулянтом и предотвращения образования сгустков. До отправки в лабораторию биоматериал должен храниться при температуре +2...+8°C (в холодильнике). Длительное хранение при комнатной температуре может привести к деградации ДНК и получению ложноотрицательных результатов. Транспортировка также осуществляется в специальных контейнерах при соблюдении температурного режима.
• Критерии непригодности: Гемолизированная или свернувшаяся кровь; пробирка, заполненная менее чем на 1/3 от номинального объема; нарушение температурного режима хранения/транспортировки; неправильная маркировка контейнера.

Срок выполнения 7-10 рабочих дней.

Референсные значения
Для каждого из шести исследуемых STS-маркеров (STSY14, SY81, SY86, SY127, SY134, SY152) в норме должен быть получен положительный сигнал при ПЦР-амплификации. Это означает, что данные участки ДНК присутствуют в Y-хромосоме обследуемого мужчины.

Интерпретация осуществляется по следующей схеме:

• Нормальный результат (делеции не обнаружены): Все шесть маркеров детектируются. Это указывает на сохранность основных генов AZF-локуса, ответственных за сперматогенез. Причину бесплодия в этом случае следует искать в других факторах (эндокринных, воспалительных, обструктивных, иммунологических).
• Выявленная микроделеция: Отсутствие сигнала от одного или нескольких маркеров. Конкретная комбинация отсутствующих маркеров позволяет определить, в каком субрегионе (AZFa, AZFb, AZFc или их комбинации) произошла потеря генетического материала.

Отсутствие амплификации внутреннего контрольного гена (например, гена амилогенина AMELX/Y) указывает на низкое качество выделенной ДНК или техническую ошибку и требует пересдачи анализа.

Интерпретация результатов
Клиническое значение результата напрямую зависит от локализации и размера выявленной делеции. Разные субрегионы AZF-локуса содержат разные наборы генов, что определяет вариабельность нарушений сперматогенеза и прогноз для получения сперматозоидов:

• Делеция в субрегионе AZFa: Встречается редко (около 1-5% всех случаев). Полная делеция AZFa почти всегда ассоциирована с синдромом "только клеток Сертоли" (Sertoli-cell-only syndrome) – самым тяжелым вариантом нарушения сперматогенеза, при котором в канальцах яичка отсутствуют не только сперматозоиды, но и их предшественники (сперматогонии). Прогноз для получения сперматозоидов при хирургической биопсии яичка (TESE) крайне неблагоприятный, часто близкий к нулю.
• Делеция в субрегионе AZFb: Также приводит к тяжелым формам азооспермии, обусловленной остановкой сперматогенеза на стадии сперматоцитов. Полные делеции AZFb или комбинированные делеции AZFb+AZFc также имеют очень низкую вероятность обнаружения зрелых сперматозоидов в ткани яичка (менее 10%).
• Делеция в субрегионе AZFc: Наиболее частый вариант (около 60-70% всех микроделеций). Фенотип может варьироваться от азооспермии до тяжелой олигозооспермии. Важно, что при делеции AZFc в 50-70% случаев в ткани яичка при микрохирургической биопсии (microTESE) могут быть найдены единичные сперматозоиды, пригодные для процедуры ИКСИ. Однако с возрастом может происходить дальнейшее ухудшение сперматогенеза вплоть до полной азооспермии.
• Частичные или точечные делеции в AZFc (например, gr/gr делеция) считаются фактором предрасположенности к нарушению сперматогенеза, но не абсолютной причиной, и их клиническая значимость требует индивидуальной оценки в сочетании с другими данными.

Ложные результаты: Ложноположительные результаты (ошибочное заключение о делеции) могут быть связаны с редкими полиморфизмами в зонах связывания праймеров, что требует подтверждения альтернативными системами детекции. Ложноотрицательные (невыявление реальной делеции) - крайне редки при использовании современной панели STS-маркеров.


Рекомендации при выявлении микроделеции:

1. Обязательное медико-генетическое консультирование пары. Необходимо разъяснить, что данная генетическая аномалия передастся всем будущим сыновьям, и они также, вероятно, столкнутся с проблемой бесплодия во взрослом возрасте.
2. Оценка прогноза для хирургического получения сперматозоидов в зависимости от типа делеции. При делециях AZFa и полных AZFb биопсия яичка часто не рекомендуется ввиду крайне низких шансов на успех.
3. Рассмотрение вопроса о преимплантационном генетическом тестировании (ПГТ) эмбрионов при планировании ЭКО/ИКСИ для предотвращения передачи делеции по мужской линии, если пара этого желает. Альтернативой может быть использование донорской спермы.
4. Дополнительное обследование для исключения сопутствующих эндокринных или иных причин бесплодия, которые могут усугублять ситуацию.